Como ya hemos comentado, a menos que alguien te deje una cepa de la bacteria ya transformada, es necesario que tengas que realizar tu ese proceso. La buena noticia es que no necesitas un equipamiento especial para conseguirlo. La mayoría de los protocolos de transformación de bacterias buscan la maxima eficiencia para introducir plásmidos que son, a veces, muy grandes.

Sin embargo, el plasmido que vamos a utilizar, pGLO, tiene una tamaño de 5000 y entra fácilmente en nuestra bacteria.

Recordamos que el plasmido contiene un origen de replicación, el gen bla, que codifica la β-Lactamasa y que proporciona resistencia al antibiótico ampicilina y el gen de la Proteína Verde Fluorescente, GFP.

Delante de este gen tenemos el promotor pBAD, que promueve la producción de la proteína cuando se une al complejo formado por arabinosa y la proteína araC.

Por último, tenemos el gen araC, que codifica la proteína regulatoria AraC. 

En ausencia de arabinosa, esta proteína se une al ADN en el sitio de unión de la ARN polimerasa, lo que impide la expresión del gen GFP.

Cuando tenemos arabinosa esta se une al la proteína araC, cambiando su conformación y posibilitando la entrada de la ARN polimerasa.

Por tanto, solo cuando tengamos arabinosa en el medio y se forme el complejo araC-arabinosa, se producirá la proteína verde fluorescente.

Imágenes originales de Marckemi – Own work, CC BY-SA 3.0

(https://en.wikipedia.org/wiki/PBAD_promoter

La casa comercial Biorad, ofrece un kit de transformación completo por un precio muy asequible (129 euros). Si además tienes ya placas de cultivo, pipetas pasteur, etc., el kit es todavía más barato (74 euros).

No necesitas microcentrífuga ni esterilizar los medios, aunque sería lo ideal. Puesto que el medio incluye un antibiótico, si no dejas los medios muchos días, solo crecerá nuestra bacteria. El requisito del baño termostático a 42 ºC, si no lo tienes, lo puedes conseguir con un roner de cocina y en cuanto a la incubación a 37ºC, pueden crecer bien a temperatura ambiente, aunque tardarán mas.

Una vez que tengas tu bacteria transformada la puedes conservar durante años sin necesidad de volver a realizar la transformación